ГРИПП ПТИЦ GRIPPUS AVIUM

Грипп птиц - острая инфекционная высоко контагиозная болезнь, протекающая в виде эпизоотии или энзоотии. Она характеризуется поражением органов пищеварения и дыхания и вызывается различными вариантами вируса гриппа типа А.

География болезни. Болезнь зарегистрирована во многих странах мира.

Возбудитель - вирус, относящийся к группе миксовирусов. Все выделенные от птиц варианты вируса гриппа имеют родственный внутренний антиген (S-антиген), выявляемый в реакции связывания комплемента. Однако у разных вариантов вируса гриппа в пределах одного типа поверхностные антигены (V-антигены) различны, что выявляется при помощи реакции торможения гемаг-глютинации и реакции нейтрализации.

Строение вирионов вируса гриппа сложное. Закрученная в виде спирали нить РНК окружена белковой оболочкой (рибонуклеопротеид). Рибонуклеопроте-ид - это типоспецифический растворимый S-антиген, который обнаруживают в РСК. Он окружен липомукопротеиновой оболочкой.

Вирион гриппа содержит пять структурных белков, из которых изучено только три: S-антиген (внутренний рибонуклеопротеиновый растворимый антиген), V-антиген (наружный гемагглютинин) и фермент нейраминидаза. На поверхности оболочки вириона имеются трубчатые выступы 8-10 ммк в длину (гемагглютинин) с интервалом в 7-10 ммк, между которыми находятся молекулы энзима.

Вирус гриппа содержит РНК (0,8-0,9%), белок (около 70%), липиды (18,5%, из которых 70% холестерина и 11,5% фосфолипидов), полисахариды (5-7%). От 5 до 15% общего вирусного белка приходится на нейраминидазу. Она играет важную роль в процессе взаимодействия вируса с клеткой. Нейраминидаза обладает антигенной специфичностью.

Интактный вирион полиморфен. Наблюдаются сферические, овальные и нитевидные (филаментозные) формы вирионов. Нитевидные формы преобладают в свежевыделенных культурах вируса.

Вирус гриппа быстро инактивируется при температуре 56° и под действием ультрафиолетовых лучей. На него губительно действует формальдегид 1 :4000, растворы кислот, дезоксихолат натрия, додецилсульфат, ионы аммония и другие вещества. Он не устойчив к эфиру, но хорошо сохраняется при низких температурах и в лиофилизированном состоянии (McQueen et. al., 1968).

Все вирусы гриппа обладают нейраминидазной активностью. Кендаль и др. (Kendal et al., 1969) изучили нейраминидазную активность 23 штаммов вируса гриппа человека и птиц и в соответствии с величиной кМ (константа Михаэлиса) Разделили эти штаммы на пять групп. В то же время по антигенной специфичности вариантных (вирусных) нейраминидаз (торможение специфическими сыворотками реакции нейраминидазы с сиалолактозой) четкого разделения провести не удалось.

Гемагглютинин - штаммоспецифический антиген, обнаруживается с помощью РТГА, РН и штаммоспецифической РСК. S-антиген общий для всех представителей типа А. Он не обладает гемагглютинирующими свойствами и не создает специфического иммунитета. Комплекс гемагглютинин- -нейраминидаза ответствен за агглютинирующую и элюирующую активность вируса. Подтипо-вая и штаммоспецифическая принадлежность вируса определяется в РТГА, РН и РСК.

Все штаммы гриппа птиц обладают гемагглютинирующей активностью в отношении эритроцитов животных многих видов. В основе этого явления лежит адсорбция вируса на поверхности эритроцитов, сопровождающаяся их склеиванием. Реакция гемагглютинации и РТГА имеют большое диагностическое значение.

Из всех типов вируса гриппа представители, относящиеся к типу А, обладают наибольшей вариабельностью в отношении V-антигена.

Предполагают, что причинами природоизменчивости вируса гриппа являются мутации и рекомбинации, возникающие в процессе адаптации вируса к частично иммунному организму или репродукции его в организме, инфицированном другим серотипом (Т. В. Пысина, 1969).

В результате изменчивости вируса гриппа в естественных условиях возникло большое разнообразие штаммов, различающихся между собой по антигенным, патогенным, гемагглютинирующим, ферментативным и другим свойствам (В. Н. Сюрин и др., 1970). Причиной естественной изменчивости свойств вирусов гриппа являются мутации и рекомбинации.

Еще сравнительно недавно ньюкаелскую болезнь птиц, неправильно именуемую чумой (а не псевдочумой) рассматривали как единственную инфекцию, вызываемую миксовирусами. Фактически при такой терминологии под чумой птиц могли подразумеваться две клинически и патологоанатомически сходные инфекции: ньюкаелская болезнь и классическая чума птиц. Однако в последнее время установлено, что возбудитель так называемой классической чумы птиц обладает всеми свойствами, присущими возбудителю гриппа типа А. Поскольку в настоящее время такие высокопатогенные полевые штаммы вируса гриппа, как первоначально выявленные штаммы возбудителя классической чумы птиц, выделяются сравнительно редко, то некоторые специалисты стали ошибочно считать, что данная инфекция не представляет эпизоотической опасности для птиц. Однако жизнь показала, что подобная точка зрения несостоятельна.

Выделять и культивировать вирусы гриппа можно заражением 10-12-дневных куриных эмбрионов в амниотическую или аллан-тоисную полости. Вирус хорошо размножается в органах и тканях эмбриона и в высоких титрах накапливается в амниотической и аллантоисной жидкостях. Серийные пассажи вируса можно проводить на хорьках или на белых мышах.

Френсис и Мэгил (Francis, Magill, 1935) впервые культивировали вирусы гриппа in vitro на кусочках куриного эмбриона в растворе Тироде. С того времени, как метод культуры ткани стал широко использоваться в вирусологических исследованиях, для размножения вируса гриппа успешно применяют первичные культуры эпителиальных клеток почек обезьян, цыплят, хомяков, свиней, телят и утят (McQueen et al., 1968).

Для размножения вируса классической чумы птиц используют культуры клеток млекопитающих и птиц: куриных эмбрионов, почек обезьян, почек телят и различные перевиваемые клетки органов человека. Размножение вируса гриппа в однослойных культурах клеток можно определять при помощи реакции гемадсорбциге (X. Эндрюс, 1967).

Для поддержания вируса гриппа птиц, получения вариантных антигенов с целью гипериммунизации животных, расплодки живых вакцинных штаммов при изготовлении вирусвакцины против-классической чумы птиц или получения диагностикумов обычно используют развивающиеся куриные эмбрионы из хозяйств, благополучных в отношении гриппа птиц.

Эпизоотология болезни. При естественной инфекции вирус гриппа можно выделить от всех домашних и некоторых видов диких птиц. Появившиеся сообщения о выделении вируса от воробьев,, крачек, перепелов, фазанов, обнаружение антигемагглютининов в сыворотках диких птиц к вирусам домашних птиц показывают, что спектр патогенности вируса гриппа птиц гораздо шире, чем представлялось раньше, и что экологию его вариантов нельзя изучать без систематических исследований различной авиафауны.

В естественных условиях вирусы гриппа птиц претерпели определенную адаптацию, проявляющуюся патогенностью только-к птицам определенных видов (грипп уток, грипп кур, грипп индеек и т. п.) (Н. Г. Осидзе, В. Н. Сюрин, 1970).

Большое число выделенных штаммов гриппа вариабельны в отношении патогенности для птицы различного возраста. В большинстве случаев такие штаммы оказывались слабопатогенными для взрослой птицы и патогенными для цыплят или, наоборот,, патогенными для взрослой птицы и менее патогенными для цыплят. Впервые о наличии среди штаммов вируса гриппа птиц антигенных вариантов сообщили в 1949 г. Бакос и Динтер (ФРГ). Им удалось выделить антигенный вариант вируса гриппа кур (штамм N), обладающий выраженной патогенностью для цыплят, но апатогенный для взрослой птицы. В антигенном отношении вирус N отличался от эталонных штаммов вируса гриппа Al как возбудителя классической чумы птиц. Долгое время вирус N рассматривали как антигенный вариант вируса классической чумы птиц, пока последний сам не оказался в сообществе гриппозных штаммов.

Как показали последующие сообщения, находка Динтера и Бакоса оказалась далеко не единственной. Через 10 лет подобный цыплячий штамм вируса гриппа был выделен в Шотландии и по международной классификации назван A. Chiken Scotland 59.

Впервые в нашей стране вирус гриппа птиц был выделен в 1967 г. в одном из птицехозяйств 3. Я. Чистовой, Н. Г. Осидзе, В. Н. Сюриным (Н. Г. Осидзе, В. Н. Сюрин, 1970). Заболевание характеризовалось быстрым течением, поражением респираторных органов, желудочно-кишечного тракта и высокой смертностью. При вирусологическом исследовании выяснилось, что данная вспышка вызвана антигенным вариантом гриппа птиц, отличающимся от имеющихся штаммов классической чумы и ньюкаелской болезни (псевдочумы) птиц.

Выделенный штамм был всесторонне изучен и обозначен авторами по принятой в то время номенклатуре ВОЗа как вирус гриппа типа А-А курица СССР 314 67.

Одновременно в период 1966-1970 гг. в ряде стран выявилось множество штаммов вируса гриппа, различающихся между собой большинством признаков. Возникла необходимость в упорядоченной классификации всех выделенных птичьих штаммов вируса гриппа. Однако эта задача оказалась далеко не легкой.

Попытки создать рациональную классификацию возбудителей этой группы начались с 1964 г. и продолжаются по сегодняшний день. Первая из них принадлежит Лиф и Каплану (Lief, Kaplan, 1964). Все известные к тому времени вирусы гриппа птиц авторы разделяли на четыре подтипа, и их классификация в то время представлялась в следующем виде (табл. 1).

Как видно из таблицы 1, вирус классической чумы птиц отнесен авторами к первому антигенному подтипу вирусов гриппа птиц.

В 1966 г. отечественные исследователи Л. Я. Закстельская, В. М. Жданов, В. И. Исаченко и И. А. Красовская предложили несколько иную классификацию вирусов гриппа птиц (табл. 2).

Сопоставляя данную классификацию с классификацией Лиф и Каплан, можно найти много общего, однако имеются и различия. Общее то, что в обеих классификациях вирус классической чумы птиц выделен в самостоятельный подтип птичьих вариантов вируса гриппа, что вирусы гриппа южноафриканской крачки и шотландских цыплят близки (но неидентичны) в антигенном отношении, объединены одним подтипом и что штаммы вируса гриппа уток чехословацкого (1956 г.) и английского происхождения (1962 г.) имеют общее родство и включены в один подтип. Помимо того, по классификации советских вирусологов вирус N и вирус гриппа индеек английского происхождения объединены в самостоятельные подтипы.

В том же году Перейра и другие исследователи предложили все выделенные штаммы вируса гриппа птиц разделить на шесть антигенных групп (табл. 3).

Как видно, возрастание числа штаммов, выделенных от индеек, вынудило автора расширить и несколько изменить классификацию Лиф и Каплан.

Однако и приведенная нами классификация Перейра (1966) уже в настоящее время не может удовлетворить врачей-диагностов. Все более ощущается необходимость унифицировать классификацию вирусов гриппа птиц и млекопитающих. В противоположность работам по гриппу человека, которыми интересуются многие международные центры, исследования по изучению гриппа птиц ведутся в крайне узких масштабах и требуют большого количества фактического материала для сравнения и стандартизации диаг-ностикумов. Для разрешения этой проблемы в 1960 г. в США под руководством Американской ассоциации здравоохранения животных был создан Комитет по гриппу животных, в задачи которого входило собрать и детально сопоставить различные штаммы вируса гриппа животных, составить каталог и дать удобную классификацию их. Рекомендуемые штаммы отбирали несколько лет, данные о каждом вирусе-изоляте вносили в анкеты. Отобранные штаммы по большинству характерных признаков ассоциировались с уже известными изученными эталонными штаммами. В ходе этой работы были выделены новые штаммы, составившие отдельные типы и подтипы.

Помимо антигенного родства, одним из признаков отбора являлась авидность штаммов. Серотипы классифицированных вирусов гриппа птиц приведены в таблице 3.

Симптоматика. Грипп птиц быстро распространяется воздушно-капельным путем и поражает слизистые оболочки клоаки и конъюнктивы. Вирусы, содержащиеся в клоачных и носовых секретах больной птицы, вирулентны. Источником вируса служит больная птица, а распространению болезни способствует корм, вода и почва. Одним из факторов распространения болезни может быть транспортировка птицы.

Протекает грипп различно. В одних случаях болезнь характеризуется коротким инкубационным периодом, повышением температуры, угнетением, прекращением яйценоскости, поражением органов дыхания и пищеварения, выраженным цианозом гребня и сережек и высокой смертностью через 24-40 часов. Погибает 80-100% птиц. В особенно острых случаях течения болезни не всегда удается регистрировать перечисленные признаки. Такую форму гриппа называют классической чумой птиц. Однако в большинстве стран в настоящее время регистрируют энзоотические вспышки гриппа птиц, протекающие легче и характеризующиеся угнетением, снижением яйценоскости, поражением органов дыхания или пищеварения (диарея). Через 2-3 недели птица выздоравливает. В подобных случаях течения инфекции гибель больной птицы может не превышать 5-10%.

Кишечная форма гриппа дезориентирует ветеринарных специалистов. Вначале ее путают с ньюкаслской болезнью, а после того как исключат последнюю, возникает подозрение на наличие новой неизвестной болезни. Но, как показывают опыты зарубежных исследователей и наши данные, вирус гриппа в подобных случаях сравнительно легко удается выделить от многих больных птиц неблагополучного хозяйства.

Однако следует иметь в виду, что экспериментально воспроизвести инфекцию, идентичную естественной картине болезни, очень трудно. Именно этот факт часто используют в качестве аргумента в спорах о причине болезни для отрицания гриппозной инфекции. Между тем подобные ситуации складывались у многих исследователей. Так, Роберте не смог воспроизвести гриппа уток штаммом A Duck Engl 62 и высказал предположение, что для развития инфекционного процесса, помимо вируса, необходимы определенные стресс-факторы. При экспериментальном заражении индюшат штаммом A T Wisconsin 66 обязательным условием воспроизведения болезни являлось переохлаждение птицы. Помимо того, успех экспериментального воспроизведения болезни часто зависит от возраста птицы.

Патологоанатомические изменения. При вскрытии больной птицы обнаруживают катаральные поражения слизистых оболочек дыхательных путей, катаралько-геморрагические энтериты и нефриты.

Диагноз. Лабораторная диагностика гриппа птиц основана на выделении и идентификации вируса серологическими методами с учетом клинических, патологоанатомических и эпизоотологичес-

Материалом для выделения вируса могут служить легкие, трахея, носовые истечения, мозг, печень, селезенка, слизистые оболочки носа и подглазничных синусов, яичники больных и подозреваемых в заболевании птиц. Из взятого материала готовят суспензию, ею заражают 10-12-дневные куриные эмбрионы в амниоти-ческую или аллантоисную полость и инкубируют 24-48 часов при 37°. После трех пассажей в амниотической полости вирус быстро адаптируется и хорошо размножается в аллантоисной полости. Присутствие вируса сравнительно легко установить при помощи РГА. Уже в первых пассажах вирус проявляет гемагглютинирую-щую активность. Выделенный вирус можно быстро идентифицировать в РТГА, РСК или в РН на куриных эмбрионах. Для этого необходимо иметь специфическую иммунную сыворотку.

В тех случаях, когда вновь выделенные штаммы вируса представляют антигенные варианты и не реагируют со специфическими сыворотками, следует использовать типоспецифические S-антисы-воротки в РСК для определения типовой принадлежности вирусов.

Обнаружение антигемагглютининов и вируснейтрализующих антител является надежным тестом лабораторной диагностики для ускоренной или ретроспективной диагностики. Нарастание титра антигемагглютининов и вируснейтрализующих антител в пробах парных сывороток указывает на наличие инфекции (при ретроспективной диагностике).

Дифференциальный диагноз. По клиническому проявлению грипп птиц трудно отличить от ньюкаслской болезни и пастереллеза кур. Поэтому дифференцировать его от указанных болезней можно при помощи лабораторных методов исследования (РТГА, РН, перекрестное заражение, бактериологическое исследование).

Вялое течение болезней органов дыхания, вызываемых вирусом гриппа, необходимо дифференцировать от инфекционного бронхита, ларинготрахеита, микоплазмоза и гемофилеза. Поскольку клинические признаки перечисленных респираторных болезней птиц могут быть сходны, дифференцировать их можно только при помощи лабораторных методов исследования, выделением и идентификацией вируса и установлением специфических антител.

Профилактика и меры борьбы. Специфического лечения гриппа птиц нет; иногда применяется симптоматическое лечение. Важное значение придается зоогигиеническим условиям содержания птицы. Часто грипп осложняется секундарными инфекциями: гемофиле-зом, холерой, колибактериозом или микоплазмозом.

Вакцинация эффективна только при возникновении классической чумы птиц. В СССР для этого применяют живую вакцину из штаммов двух степеней аттенуации: штамм Ру, апатогенный для цыплят с 5-суточного возраста и более, иммуногенный штамм Р5, апатогенный для птицы старше 45-дневного возраста. Препарат внедрен в ветеринарную практику, и применение его определено специальным наставлением.

Поскольку в настоящее время выделяется много антигенно различных вариантов вируса гриппа птиц, встает проблема приготовления инактивированных вакцин против гриппа птиц из вновь изолированных штаммов. Изучение антигенных свойств выделяемых штаммов показало, что вакцины необходимо готовить или из вновь выделенного штамма, обладающего наибольшим спектром антигенного родства с другими вариантами или в каждом случае отдельно при возникновении эпизоотии болезни готовить моновакцину. Видимо, решать вопрос о выборе штамма для изготовления противовариантной вакцины надо с учетом широты географического распространения полевого варианта вируса гриппа и характера хозяйства. Проблема гриппа приняла особую остроту в связи с созданием крупных птицехозяйств промышленного типа.

Указатель литературы

_{Закстельская Л. Я., Жданов В. М., Исаченко В. А., Красов-с к а я И. А. О классификации и номенклатуре вирусов гриппа. - Вопросы вирусологии , 1966, № 4, с. 498.}

_{Осидзе Н. Г., Сюрин В. Н. Грипп птиц (библ. 225 назв.). - Животноводство и ветеринария (биологические основы). - Проблемы ветеринарной вирусологии , М., 1970, с. 45.}

_{С ю р и н В. Н., Осидзе Н. Г., Иванова Г. А. Грипп птиц - актуальная ветеринарно-медицннская проблема. - Ветеринария , 1970, № 3, с. 45.}

_{Эндрюс X. Миксовирусы. - В кн.: Вирусы позвоночных. Под ред. проф. Сюрина. М., 1967, с. 135.}

_{Animal reference virus recommendations. - Amer. J. Vet. Res., 1970, v. 31, № 11, p. 1915-1928.}

_{Davenport F. M., Minuse E. Influenza viruses. - In: Diagnostic procedures for viral and rickettsial diseases. 3 rd ed. New York, 1964, p. 455-469.}

_{Expert Committee on Respiratory Virus Diseases. Methods of preparation of antisera for the comparison and typing of strains of influenza virus. - World Health Organiz., Technic. Report Series, 1959, № 170.}

_{Francis T. Jr., Ma gill T. P. Cultivation of human influenza virus in an artificial medium. - Science, 1935, v. 82, p. 353-354.}

_{Kendal A. P., Mandelex C. P. A comparative study of influenza virus neuraminidases using automated techniques. - Biochim. biophys. Acta, 1969, v. 185, № 1, p. 163.}

_{Lief F. S., Kaplan M. N. Problem of nomenclature of Influenza strains. WHO Ref. 22 180 11,24 January, 1964.}

_{McQueen J. L., Steele J. H., Robinson R. Q. Influenza in animals. In: Advances in Veterinary science, v. 12. New-York-London, 1968, p. 285-336.}

_{New antigenic variants of avian influenza A viruses. By H. G. Pereira, G. Long, О. M. Olesink et al. - Bull. World Health Organiz., 1966, v. 35, p. 799-802.}